非酶促水解

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CFSE(羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂)标记技术是近年发现的一种先进的活细胞标记技术。CFSE作为一种可穿透细胞膜的荧光染料,具有与细胞特异性结合的琥珀酰亚胺脂基团和具有非酶促水解作用的羧基荧光素二醋酸盐基团,是一种良好的活细胞标记物
CFSE是无色和非荧光的非极性分子,可自由扩散进入细胞,被胞内酯酶裂解,其琥珀酰亚胺脂基团不可逆地与细胞内氨基特异性结合,形成荧光素结合物,偶联并滞留于胞内。当细胞分裂时,CFSE荧光结合物可平均分配至两个子代细胞,而荧光强度为亲代细胞的一半。因此,利用流式细胞术可检测到CFSE标记的细胞增殖群体具有系列减半的荧光强度。CFSE不仅可用于细胞增殖的体外实验,也可用于追踪细胞在体内的分裂增殖过程。
淋巴细胞增殖实验以及混合淋巴细胞反应是免疫学实验研究中的基本技术和必要手段,传统方法主要利用形态学方法观察和同位素(3H-TdR)掺入法进行检测。3H-TdR掺入法主要用3H-TdR标记DNA合成原料,细胞增殖过程中放射活性会随着DNA合成的增加而增加,此法特异性良好,科学研究中常用于体外细胞增殖实验的检测;但由于该方法存在放射性污染,在科研尤其是教学中的实际应用受到一定的限制。目前常用MTT(或CCK-8)等方法进行检测,其原理主要是利用活细胞线粒体中琥珀酸脱氢酶将MTT还原成蓝紫色甲瓒颗粒,以颗粒溶解后呈现的颜色深浅反映细胞活性,借此反映细胞的增殖状态,但由于淋巴细胞增殖过程中往往伴随着活化诱导的细胞凋亡,单从细胞活性往往无法准确反映细胞的增殖状态。而利用CFSE标记技术替代传统的3H-TdR掺入和MTT法来进行免疫学相关实验如淋巴细胞增殖试验及混合淋巴细胞反应,不仅可以改善目前较为落后的技术手段,提高科研水平;还可以拓宽免疫学相关新技术在教学方面的应用领域和应用程度,全面提高学生的综合素质和能力。
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科技